10-12周龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养
更新时间:2026-03-31 点击次数:1549
1. 10-12周龄雌性SD大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG) 60IU,48h后颈椎脱臼处死。
2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。
3. 在距离大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪开皮肤、肌肉,可见白色的脂肪组织,拉出脂肪组织,可见到粉红色的卵巢,摘除卵巢。
4. 取卵巢放入预冷的含双抗的缓冲液中,用缓冲液清洗卵巢三次,去除周围组织及表面包膜。
5. 在解剖显微镜下用1mL的注射器刺破卵泡,释放颗粒细胞。
6. 将悬液通过70μm筛网过滤至50ml离心管中,之后200g,离心7min。
7. 计数,种植到24孔板和大皿中。
8. FSHR表达鉴定颗粒细胞。
大鼠卵巢颗粒细胞是卵巢卵泡内的主要功能细胞,围绕卵母细胞分布,具有分泌雌激素、孕激素、抑制素等激素的功能,参与卵泡发育、成熟及排卵的调控过程,是研究卵巢生理功能、生殖内分泌调控、卵巢相关疾病发病机制及药物筛选的理想细胞模型。大鼠卵巢颗粒细胞原代培养的核心原理是:通过无菌操作获取大鼠卵巢组织,分离卵泡并剥离颗粒细胞,采用酶解结合机械吹打的方式分散细胞,经离心洗涤、过滤纯化去除杂质及死细胞,将纯化后的活细胞接种于培养瓶/皿中,在适宜的营养条件和培养环境下,使细胞贴壁生长、增殖,获得纯度高、活性好的原代卵巢颗粒细胞。动物细胞原代培养是直接从机体取得细胞、组织进行培养的技术,卵巢颗粒细胞作为贴壁生长细胞,培养关键在于全程无菌操作、精准控制酶解条件,减少细胞损伤,优化培养环境,确保细胞贴壁率和活力,避免污染、细胞聚集或脱壁。