一、常用动物选择与特点

二、核心菌株与培养

• 标准株：M129、FH、ATCC29342（常用，致病性稳定）

• 培养：SP-4/PPLO 液体培养基（含 10–20% 血清、酵母浸膏），37℃培养 5–7 天，至培养基由红变黄；CCU（颜色变化单位） 或 CFU 定量，常用浓度：10?–10? CCU/mL

三、主流建模方法（按常用度排序）

1. 鼻腔滴入法（常用，模拟自然感染）

• 操作：小鼠麻醉后，50 μL / 只（10? CCU/mL）滴鼻，保持头仰位 1–2 min，让菌液吸入肺内；可连续滴鼻 2–3 天提高定植率

• 特点：操作简单、重复性好、接近人感染途径；缺点是菌液易流失，肺部剂量不均

2. 气管内注射法（、感染率高）

• 操作：麻醉后固定，hou

  镜暴露声门，微量注射器经气管注入30–50 μL菌液，确保进入下呼吸道

• 特点：肺部剂量、感染一致；适合定量研究，但操作难度高

3. 雾化吸入法（群体建模、均匀感染）

• 操作：密闭雾化箱，超声雾化菌液（10? CCU/mL），动物自由吸入 15–20 min

• 特点：适合大样本、感染均匀；设备要求高、浓度控制难

4. 其他方法

• 支气管肺泡灌洗接种：定位肺泡，适合局部感染研究

• 合并感染模型：MP + 流感病毒 / 细菌，模拟临床重症混合感染

四、标准建模流程（以 BALB/c 小鼠为例）

1. 动物准备：6–8 周龄 SPF 级 BALB/c，适应性饲养 1 周，雌雄各半

2. 菌液制备：MP M129 株在 SP-4 培养基培养至对数期，离心浓缩，调整至1×10? CCU/mL

3. 麻醉与接种：yi氟烷吸入麻醉，50 μL / 只滴鼻，每日 1 次，连续 2 天

4. 饲养观察：感染后每日监测体重、呼吸、活动、咳嗽；第 7–14 天为病变高峰期

5. 样本采集：处死取肺组织（左肺病理、右肺病原定量）、血清、BALF

五、模型评价指标（准组合）

1. 临床症状

• 体重下降、精神萎靡、呼吸急促、咳嗽、皮毛粗糙；体重下降≥10% 提示感染成功

2. 病原学检测（确诊）

• 肺组织 MP 定量：qPCR 检测 MP-16S rRNA/ATPase 基因；或 CCU 法计数活菌量

• BALF 涂片 / 培养：吉姆萨染色见支原体，或培养基变色

3. 病理组织学（核心）

• 大体：肺叶充血、水肿、实变、灶性灰白色病灶

• 镜下：间质性肺炎（肺泡间隔增宽、淋巴细胞 / 巨噬细胞浸润）、支气管周围炎、上皮细胞坏死脱落；可做病理评分（0–4 分）量化 severity

4. 免疫与炎症指标

• 血清：IL-6、TNF-α、IFN-γ 升高；MP 特异性 IgM/IgG 抗体阳性

• BALF：细胞总数↑、淋巴细胞 / 巨噬细胞比例↑

• 免疫组化：MP 抗原定位、炎症因子（如 IL-1β）表达

六、常见问题与优化

• 感染率低：提高菌液浓度（10?–10?）、连续接种 2–3 天、选择敏感株（M129）

• 病变不均：改用气管内注射、控制麻醉深度、确保菌液吸入

• 背景高 / 污染：严格 SPF 环境、培养基加抗生素（青mei素 / 链mei素，不影响 MP）

• 模型不稳定：固定菌株、接种剂量、日龄、性别，减少变量