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免疫组化染色技术服务

简要描述:免疫组化概述:免疫组化,也称免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。是指应用免疫学基本原理即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对其进行定位、定性及相对定量的研究。

  • 更新时间:2026-03-21
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:1244

详细介绍

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一、试剂与耗材

  • 石蜡切片

  • 二甲苯、梯度乙醇

  • 3% H?O?

  • 抗原修复液(柠檬酸盐缓冲液 pH6.0 常用)

  • PBS

  • 一抗、二抗(HRP 标记)

  • DAB 显色液

  • 苏木素、返蓝液

  • 中性树胶封片剂


二、完整步骤

  1. 脱蜡至水
    二甲苯 Ⅰ、Ⅱ 各 10min → 100%、95%、85%、75% 乙醇各 5min → 水洗。
  2. 灭活内源性过氧化物酶
    3% H?O? 室温 10–15min → PBS 洗 3 次 ×3min。
  3. 抗原修复(关键)
    柠檬酸盐缓冲液微波 / 水浴煮沸 10–15min,自然冷却至室温 → PBS 洗 3 次 ×3min。
  4. 封闭
    5%–10% 正常山羊 / 兔血清(根据二抗来源)室温 20min,甩干,不洗。
  5. 一抗孵育
    滴加一抗,4℃过夜 或 37℃ 1h → PBS 洗 3 次 ×5min。
  6. 二抗孵育
    滴加 HRP 标记二抗,37℃ 20–30min → PBS 洗 3 次 ×5min。
  7. DAB 显色
    新鲜配制 DAB,镜下控制显色(1–5min),出现棕黄色即可终止 → 流水冲洗。
  8. 苏木素复染
    苏木素染核 1–3min → 水洗 → 1% 盐酸酒精分化 → 流水返蓝。
  9. 脱水透明封片
    75%→85%→95%→100% 乙醇各 2min → 二甲苯透明 → 中性树胶封片。

三、结果判断

  • 阳性:目标部位出现棕黄色颗粒

  • 细胞核:蓝色

  • 背景应干净,无非特异性染色


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