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Product Category详细介绍
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分子基础:WGA 为 36 kDa 左右的植物凝集素,有双糖结合位点;未透化时主要标记细胞膜外糖基,透化后可标记高尔基体等细胞内糖基化结构;琥珀酰化 WGA 可增强对 β-GlcNAc 的选择性。
荧光 WGA 染色(常用):直接偶联 FITC、Alexa Fluor 系列,荧光显微镜 / 共聚焦观察,适合活细胞、快速定位;
酶标 WGA 染色:偶联 HRP/AP,DAB/BCIP-NBT 显色,普通光镜可见、可保存;
生wu素化 WGA + 链霉亲和素系统:信号放大,适合低表达样本。
样本准备
活细胞:PBS 轻洗,勿透化;
石蜡切片:脱蜡→水化→3% H?O?阻断内源性酶;
冰冻切片:固定(4% 多聚甲醛)后 PBS 洗。
封闭与孵育:1% BSA 封闭 15–30 分钟;荧光 WGA 工作液(5 μg/mL 左右,PBS 配制)室温避光 10–20 分钟(活细胞 37℃);
洗涤:PBS 3 次 ×5 分钟,彻di去除未结合 WGA;
复染与封片:DAPI 染核,抗淬灭封片剂封片;酶法需加底物显色后脱水透明封片。
透化禁忌:纯细胞膜标记严禁先透化(Triton X-100 会让 WGA 进入胞内);需同时染核 / 胞内蛋白时,优先染 WGA 再短暂低浓度透化;
浓度与时间:过高浓度或过长孵育会导致非特异背景;建议做 1、5、10 μg/mL 浓度梯度;
对照:设置同型糖(0.2 M GlcNAc)竞争抑制对照,验证特异性;
毒性:活细胞染色后及时洗涤,避免 WGA 长时间作用影响细胞活力。
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