原代神经干细胞

1. 牺牲胎龄14-16天的SD大鼠，刮除腹部手术区域的毛发，75%乙醇全身浸泡消毒。

2. 解剖孕鼠，取出子宫并冲洗。

3. 取出胚胎，置于含有冰冷的HBSS液平皿中。

4. 手shu显wei镜下剥离出大脑半球，小心地剥去脑膜和血管。

5. 剥去脑膜和血管的大脑皮质，用冰冷的HBSS液清洗三次。

6. 将大脑皮质剪成1mm³的小块，用1ml枪头轻轻吹打后，使之成为细胞悬液，并通过70um的筛网过滤。

7. 将收集到的细胞悬液离心后，用神经干细胞基础培养液重悬，然后离心，弃掉上清液。

8. 经计数和活力观察，将细胞密度调至1×10⁶/ml，以1.5×10⁵/ml的细胞密度种入T25培养瓶中，同时加入FGF-2和EGF于5%CO₂、37℃环境中培养，直到神经干细胞分裂、增殖形成较大的神经细胞球后再作传代处理。

9. 细胞传代，将神经细胞球悬液移至离心管，经低速离心后，吸弃上清液，加入神经干细胞完quan培养液，用200ul枪头吹打，使之成为单个细胞悬液，定量加入神经干细胞完quan培养液后，进行细胞计数和活力观察。

10. 传代后的细胞既可用来诱导分化，也可以继续种瓶培养，还可以冷冻保存以备后用。

11. 神经干细胞的分化和鉴定。