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茜素红染色

简要描述：茜素红染色：成骨分化是干细胞的一个重要特性。在特定的诱导培养基作用一段时间后，干细胞可分化为成骨细胞，在细胞表面沉积钙盐，形成钙结节。应用茜素红的复合物，可用于鉴定干细胞是否已成功向成骨细胞转化。

  • 更新时间：2025-02-28
  • 厂商性质：代理商
  • 访  问  量：841

详细介绍

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一、染色步骤

  1. ?样本固定?

    • 成骨诱导分化结束后，吸去培养基，用1×PBS轻柔洗涤细胞2~3次?23。

    • 加入4%多聚甲醛或10%福尔马林固定液，室温固定30分钟?12。

  2. ?洗涤与风干?

    • 去除固定液后，用蒸馏水或1×PBS冲洗3次以去除残留固定剂?12。

    • 风干载玻片或培养板，确保样本干燥?34。

  3. ?染色处理?

    • 加入0.1%茜素红染色液（溶于0.05M Tris-HCL缓冲液，pH8.3），37℃孵育5-30分钟（时间依钙盐含量调整）?12。

    • 染色后迅速用蒸馏水冲洗，避免染料残留导致背景过深?23。

  4. ?复染与观察?

    • 可选固绿染色液复染1分钟以增强背景对比度?34。

    • 显微镜下观察：钙结节呈橙红色，背景为绿色或粉红色?23。

  5. ?保存?

    • 染色后样本用封口膜密封，4℃保存可维持染色效果2周?23。

二、关键注意事项

  1. ?操作轻柔?

    • 避免剧烈震荡或长时间暴露于液体中，防止钙结节脱落?12。

  2. ?染色条件优化?

    • 染色液使用前需恢复至室温，染色时间根据镜下钙盐沉积量动态调整（通常5-10分钟）?23。

    • 染色过深时可用1%盐酸酒精分色?4。

  3. ?试剂选择?

    • 推荐使用商品化茜素红S试剂（如Beyotime ST1078-5g），纯度稳定?5。

    • 固定剂优先选择中性福尔马林，避免酸性条件干扰钙盐结构?24。


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